INVESTIGACIÓN DE PLASMODIUM

 

OBJETIVO: Conocer los procedimientos de laboratorio útiles en el diagnóstico  del paludismo ya que podemos encontrarlo en forma aislada en nuestro país.

 

GENERALIDADES: El procedimiento para el diagnóstico de protozoos en sangre circulante es el estudio al microscopio de preparaciones en portaobjetos las cuales son la extensión fina y la gruesa. La extensión fina ideal es la que tiene el grosor de una célula y en la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensión fina es útil para estudiar detalles de los hematíes y de los parásitos de la sangre, su principal limitación es que la cantidad de sangre presente en la muestra es pequeña.

     La extensión gruesa contiene 6-20 veces más sangre por unidad de superficie que la extensión fina. Es fundamental que no se fije antes de la tinción ya que los hematíes tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento. La rotura de los hematíes y la pérdida de su hemoglobina permite la visión microscópica de las demás estructuras, incluidos los parásitos sanguíneos, aunque se encuentren en la parte más profunda de la extensión. La extensión gruesa resulta útil para el diagnóstico rápido de las parasitemias demasiado leves para apreciarse en la extensión fina, pero no sirve para estudios anatómicos finos.

     La toma de sangre periférica para Plasmodium vivax y P. Malarie  deben efectuarse cuando el paciente presenta escalofríos para la búsqueda de esquizontes maduros. Para P. Falciparum se debe tomar la muestra después del acceso febril para observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes que estos desaparezcan en capilares de órganos internos.

     Con el colorante Giemsa las estructuras se tiñen de la siguiente manera:

Plasmodium: Citoplasma azul o azul grisáceo.

Eritocitos: Azulosos, grisáceos y en ocasiones rosados.

Núcleo de los Leucocitos: Violeta o morado.

Plaquetas: Violeta ligero o rosa pálido.

MATERIAL Y EQUIPO

  • Microscopios
  • 2 portaobjetos limpios y desengrasados
  • 1 lanceta desechable
  • Puente de tinción
  • Caja de Petri
  • Pipeta Pasteur con bulbo
  • Torundas de algodón con alcohol al 70%
  • Sol. Colorante de Giemsa
  • Alcohol metílico
  • Aceite de inmersión
  • Agua destilada
  • Algodón
  • Preparaciones teñidas de Plasmodium

METODO

1.-   En cada mesa se seleccionará un alumno, para puncionar el dedo pulgar o el lóbulo de la oreja previa asepsia de la región con alcohol al 70%. Una vez que se evapora el alcohol se realiza la punción, colocando 3 a 4 gotas de sangre en un extremo del portaobjetos y una gota pequeña en el extremo opuesto.

2.- Las 3 gotas se extienden con el canto de otro portaobjetos y la gota se redondea con uno de los ángulos de dicho portaobjetos a dejarla de 1 cm de diámetro.

3.-  Dejar secar las dos preparaciones a temperatura ambiente durante una hora y media, para que se fije bien la gota gruesa.

4.-  Una vez seca la preparación fina cubrir con alcohol metílico durante uno o dos minutos, procurando que no toque el alcohol a la gota gruesa.

5.- Pasado este tiempo, desechar el exceso de alcohol y dejar secar por evaporación.

6.-   Colocar algodón húmedo en la caja de Petri y encima el frotis.

7.-   Cubrir el frotis con colorante de Giemsa.

8.-  Taparlo para evitar que se seque, dejar actuar el colorante durante 10 minutos.

9.    Lavar con agua destilada.

10.  Escurrir y dejar secar.

11.-  Observar al microscopio con objetivos de 10X, 40X y 100X agregando a este ultimo aceite de inmersión.

12.-  Anotar resultados de observación y hacer dibujos.

 

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